關(guān)鍵詞：菌種復(fù)壯 純種分離 宿主復(fù)壯 病毒 寄生微生物 誘變 基因突變 淘汰 菌絲頂端分離 培養(yǎng)基 無菌操作

菌種復(fù)壯指通過淘汰衰老、死亡、變異的細(xì)胞來挑選具有優(yōu)良性狀的細(xì)胞，以此來恢復(fù)菌種原有優(yōu)良性狀和活力的過程。常用方法有純種分離法、宿主復(fù)壯法、誘變法、淘汰法等。針對不同類型的菌種和復(fù)壯目的，可以采用多種方法。

一、純種分離法

純種分離法是目前應(yīng)用廣泛的菌種復(fù)壯方法之一，通過挑取單個性狀優(yōu)良的菌落并進(jìn)行多次分離培養(yǎng)，以去除混雜在菌種中的衰老、死亡和變異的細(xì)胞，從而篩選出具有優(yōu)良性狀的菌種，以達(dá)到復(fù)壯的目的。

操作步驟如下：

1.準(zhǔn)備：無菌環(huán)境下，在超凈工作臺上用無菌接種針或接種環(huán)從需要復(fù)壯的菌種中挑取一個性狀優(yōu)良的單菌落。

2.分離：在準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿上劃線分離，注意劃線手法，確保成熟后的菌落便于后續(xù)挑選。操作結(jié)束后將培養(yǎng)皿放在適宜的環(huán)境中培養(yǎng)。

3.挑選：待菌落生長成熟后，于超凈工作臺上挑選外觀、顏色、形態(tài)優(yōu)良的菌落，進(jìn)行下一次劃線分離。

4.重復(fù)操作：重復(fù)數(shù)次上述操作至分離出性狀優(yōu)良的純種菌落。

此外，純種分離法還包括稀釋平板法、涂布平板法等多種方式，可以根據(jù)菌種特性和實驗條件選擇適合的方法來達(dá)到復(fù)壯菌種的目的。

圖示為劃線分離法

二、宿主復(fù)壯法

宿主復(fù)壯法適用于病毒、立克次氏體等細(xì)胞內(nèi)寄生的微生物。通過將待復(fù)壯的菌種接種到昆蟲或植物的宿主細(xì)胞內(nèi)，利用宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜的代謝環(huán)境，提高菌種的活力，從而達(dá)到復(fù)壯的目的。

操作步驟如下：

1.準(zhǔn)備：準(zhǔn)備昆蟲或植物的宿主細(xì)胞，在無菌條件下將宿主細(xì)胞接種到適宜的培養(yǎng)基上。

2.寄生：將病毒等需要復(fù)壯的微生物接種到宿主細(xì)胞內(nèi)，使其寄生并感染宿主細(xì)胞。

3.挑選：培養(yǎng)一段時間后，觀察宿主細(xì)胞的病變程度，從病變程度嚴(yán)重或已病死的宿主細(xì)胞內(nèi)分離出典型菌株再次感染健康的宿主細(xì)胞。

4. 重復(fù)操作：重復(fù)上述操作至菌種活力得到提高。

圖示為病毒寄生宿主細(xì)胞

三、誘變法

通過物理或化學(xué)因素使菌種發(fā)生基因突變，從而篩選出具有優(yōu)良性狀的菌株。誘變法存在一定的風(fēng)險，可能會導(dǎo)致菌種發(fā)生不可逆的突變，使用時需注意誘變劑的劑量或輻射時間。

操作步驟如下：

1.準(zhǔn)備：準(zhǔn)備好需要復(fù)壯的菌種培養(yǎng)基，選擇合適的誘變劑，如紫外線、抗生素等。

2.誘變：使用誘變劑處理培養(yǎng)基，使菌種發(fā)生基因突變。

3.挑選：將培養(yǎng)基放在適宜的環(huán)境中至培養(yǎng)結(jié)束，無菌環(huán)境下挑選出具有優(yōu)良性狀的突變株進(jìn)行復(fù)壯。

圖示為用紫外線處理培養(yǎng)皿

四、淘汰法

淘汰法通過對衰退的菌種進(jìn)行處理，如高溫、低溫的培養(yǎng)環(huán)境，低營養(yǎng)的培養(yǎng)基等，淘汰菌種中的衰老、死亡和變異的細(xì)胞，從而篩選出適應(yīng)力強(qiáng)、有活力的細(xì)胞。淘汰法可以有效去除衰退個體，增強(qiáng)菌種的優(yōu)良性狀。

操作步驟如下：

1.準(zhǔn)備：無菌環(huán)境下，將待復(fù)壯的菌種接種到低營養(yǎng)的培養(yǎng)基上，或接種到正常的培養(yǎng)基上放在高溫或低溫環(huán)境中培養(yǎng)。

2.挑選：培養(yǎng)周期結(jié)束后，在超凈工作臺上挑選出適應(yīng)力強(qiáng)、有活力的菌落進(jìn)行下一步的復(fù)壯操作。

圖示為通過調(diào)節(jié)溫度改變培養(yǎng)環(huán)境

五、其他方法

1.菌絲頂端分離：無菌環(huán)境下挑取健壯菌絲體的頂端部分進(jìn)行純化培養(yǎng)，以恢復(fù)菌種原有的優(yōu)良性狀。此方法適用于不產(chǎn)孢子的絲狀菌。

2.適當(dāng)更換培養(yǎng)基：在菌種傳代培養(yǎng)中適當(dāng)改變培養(yǎng)基成分，以刺激菌絲生長，提高菌種活力。

3.定期進(jìn)行菌種分離：對生產(chǎn)中應(yīng)用的菌種每1-2年進(jìn)行一次分離復(fù)壯，以保持菌種的優(yōu)良性狀和活力。

六、注意事項

1.復(fù)壯前需對菌種進(jìn)行鑒定，保證菌種的純度。

2.復(fù)壯操作過程中要注意無菌操作，避免培養(yǎng)基或菌種被雜菌污染，保證菌種正常生長。

3.應(yīng)對復(fù)壯后的菌種進(jìn)行性能評價，確保其具有穩(wěn)定的優(yōu)良性狀。

綜上所述，菌種復(fù)壯是一個綜合性的過程，需要根據(jù)具體情況選擇合適的方法并按操作規(guī)范嚴(yán)格執(zhí)行。通過菌種復(fù)壯，可以恢復(fù)菌種原有的生命活力，提高菌種的生長和代謝速度，為發(fā)酵生產(chǎn)、科學(xué)研究等提供具有優(yōu)良性狀的菌種。